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多功能氧化还原电位在线分析仪新方案用7个大肠杆菌菌落替换了熔断器,每个菌落被赋予不同的荧光蛋白基因。只有当这些基因被打开,允许细菌制造蛋白质时,它们才会发出荧光。颜色——黄色、绿色和红色——因表达的基因不同而不同。所有这些差别用肉眼都能清楚地辨别出来。在他们手中有了一个彩色的菌落后,氧化还原电位在线分析仪研究人员用一对不同颜色的细菌创建了一个代码。这七种颜色给了它们49种组合,它们编码了26个不同的字母和23个字母数字符号,如“@”和“$”。他们用成对的彩色细菌写成行的信息。为了“打印”这些信息,氧化还原电位在线分析仪研究人员将细菌转移到细菌生长的培养基琼脂平板上,然后压一张硝化纤维“纸”,这张纸是用来固定细菌的。此时,硝化纤维纸中的细菌仍然是看不见的。但是,通过将硝化纤维纸压入含有化学触发器的琼脂培养皿中,激活荧光蛋白的表达,信息的接受者可以打开关键基因并点亮颜色。(被选择点亮的蛋白质通常不会被细菌利用,所以它们通常会保持沉默,直到被研究人员激活。)只要接收者知道什么颜色对应什么字符,信息就知道了。但沃尔特和他的同事们又增加了一层防护。他们将基因插入对某些抗生素有抗药性的细菌中;这个想法是,只有耐抗生素的细菌携带真正的信息。如果这些信息落到错误的人手里,一旦基因被激活,接受者就会看到一堆颜色,无法阅读。但是如果接受者加入了正确的抗生素,不耐药的细菌和它们的颜色就会消失,使真正的信息变得清晰。第一个例子是“这是来自沃尔特·拉布@塔夫斯大学2010年的生物编码信息”,发表在9月26日的《美国国家科学院院刊》上。“这是一个很酷的想法,”伊利诺伊大学香槟分校的化学家Kenneth Suslick说。事实上,它与康奈尔大学物理学家保罗·麦克尤恩的科幻惊悚小说《螺旋》非常相似。书中,一位年长的真菌生物学家利亚姆·康纳(Liam Connor)通过将一种荧光蛋白的基因插入不同真菌的DNA,解决了一个存在了几十年的谜团。尽管身为科幻小说迷的沃尔特说,他想马上读这本书,但他说他以前从未听说过这本书。现在,在他的生物发光细菌的帮助下,他也可以写一些关于自己的传说。

发光细菌是一类在正常的生理条件下能够发射可见荧光的细菌,这种可见荧光波长在450-490nm之间,在黑暗处肉眼可见。全世界已命名的发光细菌有以下几种:① 氧化还原电位在线分析仪属于异短杆菌属(Xenorhabdus)的有发光异短杆菌(Xenorhabdus luminescens);② 氧化还原电位在线分析仪属于发光杆菌属(Photobacterium)的有明亮发光杆菌(Photosbacterium phosphoreum)和鳆发光杆菌(P.1eiognathi);③多功能氧化还原电位在线分析仪 属于希瓦氏菌属(Shewanella)的有羽田希瓦氏菌(Shezoanella hanedai),以前也曾经把它归类为交替单胞菌属(Alteromonas)的海氏交替单胞菌(Alteromonas hanedia);④ 属于弧菌属(Vibrio)的有哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)、美丽弧菌生物型I(V.splendidus biotype I)、费氏弧菌(V.fischeri)、火神弧菌(V.1ogei)和东方弧菌(V.orientalis)。霍乱弧菌(V.cholerae)和地中海弧菌(V.mediterranei)中的某些菌株有发光现象,曾有报道易北河弧菌(V.albensis)有发光现象,后将其重新分类归人霍乱弧菌(V.cholerae)。另外,中国学者分离到一株淡水发光细菌命名为青海弧菌(V. qinhaiensis),还没收入伯杰氏细菌手册。在以上发光细菌中,异短杆菌和青海弧菌属于淡水发光细菌,其它都是海洋细菌。发光细菌主要分布于海洋环境中。

湖州多功能氧化还原电位在线分析仪发光机理的研究表明,不同种类的发光细菌的发光机理是相同的,是由特异性的荧光酶(LE)、还原性的黄素(FMNH2)、八碳以上长链脂肪醛(RCHO)、氧分子(O2)所参与的复杂反应,氧化还原电位在线分析仪大致历程如下:FM NH2+LE → FMNH2·LE+ O2 → LE·FM NH2·O2+ RCH O→LE·FMNH2·O2·RCH0 → LE+ FM+H2O+RCOOH+光。概括的说就是,细菌生物发光反应是由分子氧作用,胞内荧光酶催化,将还原态的黄素单核苷酸(FMNH2)及长链脂肪醛氧化为FMN 及长链脂肪酸氧化,同时释放出最大发光强度在波长为450-490nm处的蓝绿光。其中三步反应产生三种中间产物,寿命极短,很难分离出来。荧光素酶是生物体内催化荧光素或脂肪醛氧化发光的一类酶的总称,细菌荧光素酶是含α、β两个多肽亚基的单加氧酶,只有两个亚基共存时才有活性。从不同海洋细菌中提取到的细菌荧光素酶其分子量差别较小。王安平等分离纯化了东方弧菌的荧光酶并对其酶学性质进行了研究,分离得到了两个分子量分别为44 kD和41 kD的亚基,该酶反应的最佳温度在l8℃ ,超过25℃酶即迅速失活。

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